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没食子酸调节脂质代谢的作用效果(二)

发布时间:2021-07-19 16:22 作者:北纳生物编辑-陈丹


2 结果与分析

2.1 没食子酸对猪胰α-淀粉酶酶活性抑制作用

2.1.1 酶质量浓度确定

猪胰α-淀粉酶|北纳生物
图1 质量浓度对酶活性的影响 

由图1可知,随着酶质量浓度的增加,吸光度增大,淀粉酶质量浓度在0.16~0.64 mg/mL范围内,有较好的线性关系,随着酶质量浓度的增加,底物被快速消耗,酶与底物的反应速率减慢,最终将达到平衡。由图中可以看出,要使酶与底物保持最大反应速率,α-淀粉酶质量浓度选择在0.64 mg/mL较为合适。

2.1.2 反应时间确定

反应时间|北纳生物
图2 最佳反应时间的选择 

还原性糖生成量随反应时间变化的关系如图2所示,当反应时间在0~15 min时,吸光度与时间基本呈线性关系,随着时间延长,吸光度变化减小,还原性糖含量增长减慢,说明在15 min内的反应速率可认为近似达到初始速率。因此,体系最适反应时间选择15min较为合适。

2.1.3 酶、底物、抑制剂(没食子酸)添加顺序确定

没食子酸的A、B、C 3 种加入顺序的抑制率分别为25.97%、19.54%、30.36%。结果表明,A、B、C 3 种添加顺序的抑制率差异不显著(P>0.05),可以看出顺序C(没食子酸与α-淀粉酶先进行预热,再加入淀粉溶液反应)的抑制效果最佳,而顺序B的抑制率相对较小,以顺序C为最佳添加顺序,与庄玲玲 、刘雯等实验中淀粉酶抑制作用建立所用的添加顺序一致。

2.1.4 最优条件下没食子酸对猪胰α-淀粉酶的抑制效果

不同质量浓度的没食子酸对α-淀粉酶活性均有一定的抑制作用,且随着质量浓度的增加,抑制能力逐渐增强。在实验设定的初始质量浓度时,没食子酸的抑制率最低,仅为28.27%。在质量浓度为1~9 mg/mL区间时,没食子酸对α-淀粉酶活性的抑制呈剂量依赖关系,抑制率随着剂量的加大而增大。在此之后,随样品质量浓度的加大,抑制率无明显增长。当没食子酸单体质量浓度达到15 mg/mL时,抑制率达到95.52%。通过测定没食子酸对α-淀粉酶的半抑制浓度I C 50,并与阳性对照药物拜糖平对α-淀粉酶的IC 50进行比较,IC 50越小,表明抑制效果越小。经计算得到,没食子酸对α-淀粉酶的IC 50为3.01 mg/mL,拜糖平对α-淀粉酶的IC 50为0.236 mg/mL。

2.2 没食子酸对猪胰蛋白酶酶活性的抑制作用

2.2.1 酶质量浓度筛选

随着酶质量浓度的增加,吸光度增大。当酶质量浓度达到0.63 mg/mL时,吸光度已趋于饱和,说明酶在这一范围内基本反应完全。因此,酶质量浓度选择在0.63 mg/mL能够保证酶的充分反应。

酶质量|北纳生物
图3 最佳反应时间的选择 

2.2.2 反应时间的筛选酪氨酸生成量

随反应时间变化的关系如图3所示,当反应时间在0~30 min时,随着时间的增加,酶与底物在不断地反应生成产物。30 min之后,随着时间的延长,吸光度变化很小,说明产物生成速率减慢,酶与底物的反应已较为完全。因此,体系最适反应时间选择30最为合适。

2.2.3 酶、底物、抑制剂(没食子酸)添加顺序筛选

酶质量浓度|北纳生物
图4 反应体系中添加顺序对抑制作用的影响 

由图4可知,没食子酸的A、B、C 3种加入顺序的抑制率分别为95.91%、94.08%、94.35%。结果表明,3 种添加顺序的抑制率差异不显著(P>0.05)。对于没食子酸来说,A、B、C 3种添加顺序的抑制率十分接近,其中顺序A的抑制率稍高,顺序C仅比顺序B高出0.27%,说明添加顺序的不同对没食子酸单体抑制作用的影响很小。为了研究没食子酸对胰蛋白酶的抑制作用,避免底物的干扰,结合α-淀粉酶添加顺序的实验结果,选取顺序C为添加顺序。

2.2.4 最优条件下没食子酸对猪胰蛋白酶活性的抑制作用

不同质量浓度的没食子酸对胰蛋白酶活性均呈现很强的抑制作用。在质量浓度仅为0.4 mg/mL时,抑制率就达到94.56%,当质量浓度上升到3.2 mg/mL时,其抑制率为99.24%,已无明显增长。经SPSS软件分析得到,没食子酸对胰蛋白酶的IC 50为0.019 mg/mL。

3 结 论

研究表明,没食子酸对胰α-淀粉酶和胰蛋白酶均有良好的抑制效果,与之前文献报道的没食子酸对α-淀粉酶活性影响效果相符。当没食子酸质量浓度达到15 mg/mL时,对α-淀粉酶活性最大抑制率为95.52%;当其质量浓度为3.2 mg/mL时,对胰蛋白酶活性最大抑制率达到99.24%。本结果对没食子酸抑制两种胰酶的作用进行了初步研究,为后续揭示其抑制作用机理及没食子酸调节脂质代谢功能产品的开发利用提供了参考。

相关链接:酶质量,没食子酸猪胰α-淀粉酶酶,还原性糖,抑制率,胰酶,代谢,北纳生物

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