UPLCMS/MS方法析果蔬中18 种SDHIs杀菌剂（一）

琥珀酸脱氢酶抑制剂（succinate dehydrogenase inhibitors，SDHIs）是一类通过抑制病原菌琥珀酸脱氢酶活性，从而干扰其呼吸作用的新型杀菌剂，是近年发展很快且应用前景最广的一类新型农药，包括麦锈灵、氟酰胺、灭锈胺、甲呋酰胺、萎锈灵、氧化萎锈灵、啶酰菌胺、噻呋酰胺、呋吡菌胺、吡噻菌胺以及近2 a新研发的氟吡菌酰胺、联苯吡菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑环菌胺和氟唑菌苯胺等。目前，该类杀菌剂主要应用于蔬菜、水果、粮食等经济作物的杀菌和防霉。虽然该类杀菌剂毒性较低，但因其使用日益广泛，SDHIs杀菌剂及代谢物残留对农产品质量安全造成严重影响。美

欧盟规定啶酰菌胺、吡噻菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑菌酰胺在西红柿中的限量为3 mg/kg，我国规定啶酰菌胺在草莓和苹果中的限量分别为3 mg/kg和2 mg/kg，新版GB 2763—2019《食品中农药最大残留限量》增加了吡唑萘菌胺、吡噻菌胺、氟唑环菌胺、氟唑菌酰胺和苯并烯氟菌唑在大麦、小麦、黄瓜、香蕉、结球甘蓝、畜禽肉等食品中的临时限量，其他SDHIs杀菌剂还没有相应的MRL值。有关此类农药检测的标准方法较少，仅见GB 23200.8—2016《水果和蔬菜中500 种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法》和GB/T 20769—2006《水果和蔬菜中405 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》中涉及了麦锈灵、氟酰胺、灭锈胺等几种，其他SDHIs杀菌剂也没有相应的国标检验方法。因此有必要开展快速分析SDHIs杀菌剂方法的研究，为该类杀菌剂的使用、监管提供技术依据。

目前，国内外报道的关于食品中部分SDHIs类杀菌剂的分析方法主要有免疫分析法、气相色谱（gas chromatography，GC）法、气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）法、液相色谱（liquid chromatography，LC）法和液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法。LC-MS/MS法分离能力强，可同时定性定量测定多组分，研究者采用较多。Abad-Fuentes等建立了LC-MS/MS法测定果蔬中吡唑萘菌胺等7 种SDHIs杀菌剂；孙亚米等采用LC-MS/MS法快速测定果蔬中啶酰菌胺、呋吡菌胺、噻唑菌胺、氟吡菌酰胺、联苯吡菌胺和吡噻菌胺等16 种新型酰胺类杀菌剂；杨欢利用LC-MS/MS法测定果蔬中8 种新型SDHIs杀菌剂。

Han Lijun采用了GC-MS/MS和UHPLC-MS/MS分别测定鲶鱼肌肉组织中219 种和128 种农药，涵盖部分SDHIs杀菌剂；还有研究者采用超高效液相色谱-串联质谱（ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）法检测柑橘、土豆、大豆及水果加工产品等不同基质中上百种农药或其代谢物的残留，包括啶酰菌胺、氧化萎锈灵、灭锈胺、吡噻菌胺等，而有关异丙噻菌胺、氟唑菌酰胺、苯并烯氟菌唑等新一代SDHIs杀菌剂在果蔬中残留的检测方法至今鲜见报道。

考虑到不同SDHIs杀菌剂限量范围较宽以及样品基质的复杂性，为满足样品实际测定需要，本研究采用经济、简便、易操作的QuEChERS（quick, easy, cheap,effective, rugged and safe）前处理方法与UPLC-MS/MS技术结合，建立了能同时分析果蔬中18 种SDHIs杀菌剂的UPLCMS/MS方法。本方法快速、操作简便、分析时间短、灵敏度高，可满足果蔬中SDHIs杀菌剂的定量检测需要。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

76 份果蔬样品购自湖北武汉中百仓储超市、沃尔玛超市、武商超市3 家超市。

标准品：麦锈灵、氟酰胺、灭锈胺、氟吡菌酰胺、甲呋酰胺、萎锈灵、氧化萎锈灵、联苯吡菌胺、呋吡菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑菌苯胺、吡噻菌胺、氟唑环菌胺、氟唑菌酰胺、苯并烯氟菌唑、异丙噻菌胺、啶酰菌胺、噻呋酰胺（均为液态标准物质，质量浓度均为100 μg/mL） 阿尔塔科技有限公司。

乙腈（色谱纯） 德国Merck公司；甲酸（色谱纯）美国Thermo Fisher公司；醋酸钠、无水硫酸镁（均为分析纯） 国药集团化学试剂有限公司；N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）（40～60 µm）上海安谱科学仪器有限公司；超纯水由Millipore系统制备。

1.2 仪器与设备

AB SCIEX Triple QuadTM 4500液相色谱-质谱联用仪美国AB SCIEX公司；ME204电子天平 梅特勒-托利多仪器有限公司；MS3 digital涡旋仪 德国IKA公司；Centrifuge 5810离心机 艾本德中国有限公司；0.22 μm有机相滤膜 天津津腾公司；Milli-Q超纯水系统美国Millipore公司。

1.3 方法

1.3.1 UPLC条件

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；进样量2 μL；柱温35 ℃；流动相：A相为0.1%甲酸溶液，B相为乙腈，流速0.3 mL/min。

1.3.2 质谱条件

离子源：电喷雾电离源（electrospray ionization，ESI）；扫描方式：正负离子模式同时扫描；检测方式：多反应监测，ESI+电压5 500 V，ESI-电压-4 500 V；离子源温度500 ℃；气帘气压力35 psi；碰撞气压力9 psi；雾化器压力50 psi；辅助气压力50 psi；入口电压10.0 V；碰撞室出口电压6 V。

1.3.3 标准溶液配制

分别准确移取质量浓度为100 μg/mL的麦锈灵、氟酰胺、灭锈胺、氟吡菌酰胺、甲呋酰胺、萎锈灵、氧化萎锈灵、联苯吡菌胺、呋吡菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑菌苯胺、吡噻菌胺、氟唑环菌胺、氟唑菌酰胺、苯并烯氟菌唑、异丙噻菌胺、啶酰菌胺、噻呋酰胺标准品各1.0 mL至10 mL容量瓶，用乙腈定容到10.00 mL，18 种SDHIs的标准品母液质量浓度均为10.0 μg/mL，于-18 ℃保存。

标准品混合中间液：准确移取18 种SDHIs的标准品母液各1.0 mL于20 mL容量瓶，用乙腈定容到20.00 mL，各化合物质量浓度均为0.5 μg/mL，于4 ℃保存。

标准曲线工作液：用乙腈稀释混合中间液，配制系列标准曲线为0.5、5、20、50、100、200 ng/mL。

1.3.4 样品前处理

取新鲜果蔬样品，用粉碎机粉碎混匀，于-18 ℃冷冻保存。

准确称取10.00 g（准确至0.01 g）试样于50 mL离心管中，加10.0 mL乙腈，振荡混匀2 min，再加入5 g无水硫酸镁和1 g醋酸钠，混匀，4 000 r/min离心5 min。取3 mL上清液于15 mL离心管中，加入100 mg无水硫酸镁、50 mg PSA，涡旋3 min后，于4 000 r/min离心3 min，过0.22 μm有机滤膜，供UPLC-MS/MS待测。

1.3.5 实际样品检测

采集湖北武汉中百仓储超市、沃尔玛超市、武商超市共3 家超市76 份蔬菜及水果，采用本研究建立的前处理方法和液相色谱-质谱法测定18 种农药的残留量。

1.4 数据统计及图表绘制

本研究所有数据均在AB SCIEX公司的Analyst Software软件下采集，采用MultiQuant3.0.2软件进行定性定量分析，采用Origin 9.0进行图像处理。

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