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UPLCMS/MS方法析果蔬中18 种SDHIs杀菌剂(二)

发布时间:2022-01-18 16:22 作者:北纳生物编辑-陈丹

2 结果与分析

2.1 质谱条件与色谱条件的优化

为获得18 种SDHIs最佳灵敏度和分离效果,对质量浓度为0.5 mg/L的18 种SDHIs单标溶液依次采取蠕动泵注射的方式进行一级质谱扫描。结果显示:在正离子模式下,噻呋酰胺难以形成稳定的[M+H]+峰,其他17 种杀菌剂在正离子模式下均有较好响应;在负离子模式下,噻呋酰胺能形成稳定的[M-H]-峰。因此本实验采取正负离子同时扫描,噻呋酰胺为负离子扫描,其他17 种SDHIs正离子扫描。为了得到响应值高,稳定性好的子离子,优化了质谱和液相色谱参数。

2.2 样品前处理方法的优化

2.2.1 提取

QuEChERS法是经典的果蔬农药残留检测方法,包含原始QuEChERS法、AOAC的QuEChERS法和欧盟的QuEChERS法。盐析法也是农残检测中常用的前处理方法。本实验选择毛白菜为实验对象,通过加标回收,考察QuEChERS及盐析法对SDHIs的提取效率。5 种前处理方法分别为:1)原始QuEChERS法,10 g样品+10 mL乙腈+4 g无水MgSO4+1 g NaCl;2)欧盟的QuEChERS法,10 g样品+10 mL乙腈+4 g无水MgSO4+1 g NaCl+1 g柠檬酸三钠+0.5 g柠檬酸氢二钠;3)AOAC的QuEChERS法(未酸化),10 g样品+10 mL乙腈+4 g无水MgSO4+1 g醋酸钠;4)AOAC的QuEChERS法,10 g样品+10 mL乙腈+4 g无水MgSO4+1 g醋酸钠+0.1%乙酸;5)NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》的提取方法,10 g样品+10 mL乙腈+7 g NaCl。

考察不同前处理对提取效果的影响,具体操作步骤如下:取均质的10 g毛白菜样品(每个样品3 个平行),加入100 μL质量浓度为1 μg/mL的混合标准溶液,静置30 min后,用以上5 种方法进行提取,涡旋3 min,取上清液,过0.22 μm滤膜检测,通过计算18 种化合物的回收率计算提取方式。

采取方法3)整体提取效果较好,总体回收率好。方法1)中整体回收率较低,氧化萎锈灵回收率仅65.7%,方法5)中超过一半样品的回收率高于100%,有明显的基质增强效应,方法2)平均回收率不及方法3)和方法4),方法3)和方法4)的回收率差别不大,区别在于噻呋酰胺在酸化条件下回收率高于120%,综合考虑,本实验选择方法3)提取,即称取10 g样品,加入10 mL乙腈,涡旋振荡,加入4 g无水MgSO4和1 g醋酸钠混匀。

2.2.2 净化与基质效应

QuEChERS法常用到净化剂C18、N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)和石墨化碳黑(graphitized carbon black,GCB)。C18可用来除脂,PSA可用来消除各种果蔬的有机酸、色素及一些糖和脂肪酸,GCB可用来去除甾体、叶绿素等色素,但对含苯官能团的化合物有较强吸附作用。杨欢等在研究8 种新型SDHIs杀菌剂快速测定中,对净化试剂进行比较和优化,发现C18的加入对氟唑环菌胺、联苯吡菌胺等化合物有吸附作用,本实验参考其研究结果,使用PSA粉末进行净化。并考察不同质量PSA(0、20、40、50、80、100、200、500 mg)与200 mg无水MgSO4的净化效果,选取基质为毛白菜、芹菜、梨、橙4 种。

分别用乙腈和空白基质溶液配制相同质量浓度的标准溶液,在相同色谱条件下测定,按照基质效应/%=B/A×100计算样品基质溶液的基质效应,其中B为目标化合物在空白基质溶液中的响应值,A为目标化合物在乙腈中的响应值。通过基质效应强弱评价方法的净化效果。结果表明,PSA的加入能有效达到净化效果,并发现在取上清液3 mL的条件下,使用50 mg PSA即能有效降低基质增强效应,加大PSA量对净化效果无显著性影响,与杨欢等的研究相同。

2.2.3 线性范围、检出限及定量限

在空白样品中添加一系列质量浓度的目标化合物,在1.3.4节的前处理条件下进行检测,以目标物质量浓度为横坐标,质谱定量峰面积为纵坐标绘制标准曲线,得出18 种农药在0.5~200 ng/mL范围内呈现出良好的线性关系,相关系数R均大于0.99,以信噪比RSN=3确定检出限,以RSN=10确定定量限,18 种SDHIs检出限为0.5~2.0 μg/kg,定量限为1.5~6.0 μg/kg。杨欢等研究的8 种SDHIs杀菌剂检出限为0.2~1.7 μg/kg,本方法检出限与其水平相当,均满足检测需要。

在毛白菜、芹菜、梨、橙4 种基质中分别添加标准溶液,按照1.3.4节进行样品前处理,按高中低3 水平对空白样品提取液进行添加,每个添加水平平行测定6 次,计算平均回收率和相对标准偏差(relative standard deviation,RSD),结果见表5。各种目标化合物在4 种基质中3 个添加水平(10、50 μg/kg和150 μg/kg)下的回收率为83.6%~109.4%,RSD为1.2%~8.4%。孙亚米等[28]利用LC-MS/MS建立的16 种SDHIs杀菌剂回收率为85.7%~103.9%;杨欢等建立的8 种SDHIs杀菌剂回收率为71.4%~121.3%,本研究与其相比,均能满足果蔬中农药残留检测的回收率要求。

2.3 实际样品检测结果

采用优化建立UPLC-MS/MS快速分析方法对市售沃柑、橙、梨、黄瓜、番茄、菠菜、辣椒、山药、上海青、白菜、茄子、芹菜、豇豆、油麦菜等76 份样品进行测试。结果显示氟吡菌酰胺检出样品2 个,分别为西红柿和黄瓜,检出值分别为10.2、22.6 μg/kg;氟唑菌酰胺检出样品1 个,为黄瓜,检出值为7.8 μg/kg;啶菌酰胺在芹菜、黄瓜、番茄、菠菜、上海青、茄子6 种蔬菜共12 个样品中均有检出,检出值为7.4~1 966 μg/kg,其中在2 批次芹菜中检出值分别高达1 017、1 966 μg/kg。噻呋酰胺检出样品1 个,为沃柑,检出值为47.2 μg/kg。

3 结 论

本实验建立了同时分析果蔬中18 种SDHIs杀菌剂残留的UPLC-MS/MS检测方法。该方法灵敏度高、重复性好,经过系列方法学验证,结果表明18 种目标化合物在0.5~200 μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99,方法检出限为0.5~2.0 μg/kg,定量限为1.5~6.0 μg/kg。各种目标化合物在4 种基质中3 个添加水平(10、50 μg/kg和150 μg/kg)下的回收率为83.6%~109.4%,RSD为1.2%~8.4%(n=6)。

实际样品的检测结果表明氟吡菌酰胺、氟唑菌酰胺、啶酰菌胺和噻呋酰胺均在黄瓜、西红柿、芹菜、沃柑等果蔬中有残留,啶菌酰胺残留现象严重。该方法操作简单、净化效果好,适用于果蔬中SDHIs杀菌剂的快速检测,不仅可以满足当前国际上对果蔬中这18 种SDHIs杀菌剂MRL的检测要求,也可推进果蔬中SDHIs杀菌剂残留的食品安全风险评估,为政府监管部门数据支撑具有重要的实际意义和社会效益。

本文章来源于——《食品科学网》,如有版权问题,请与本网联系

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