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色谱法定量的依据在一定的操作条件下,检测器的响应 信号(色谱峰的峰面积或峰高)与进入检测器组分的量成正比。
常用的定量方法有如下几种:
(1)归一化法:当试样中有n个组分,各组分的量分别为m1, m2 ,m3 ----mn ,全部组分都显示出色谱峰,可用归一化法也称为面积归一化法。归一化法简便、准备。进样量的准备性和操作条件的变动对测定结果影响不大,但仅适用于试样中所有组分全部出峰的情况。
(2)内标法:取标准被测成分,按依次增加或减少的已知阶段量,各自分别加入各单体所规定的定量内标准物质中,调制标准溶液。分别取此标准液的一定量注入色谱柱,根据色谱图取标准被测成分的峰面积、峰高和内标物质的峰面积、峰高的比例为纵坐标,取标准被测成分量和内标物质量之比,或标准被测成分量为横坐标,制成标准曲线。
然后按单体中所规定的方法调制试样液。在调制试样液时,预先加入与调制标准液时等量的内标物质。然后按制作标准曲线时的同样条件下得出的色谱,求出被测成分的峰面积或峰高和内标物质的峰积或峰高之比,再按标准曲线求出被测成分的含量。
所用的内标物质,应采用其峰面积的位置与被测成分的峰的位置尽可能接近并与被测成分以外的峰位置完全分离的稳定的物质。
(3)标准曲线法也称为外标法:取标准被测成分按依次增加或减少阶段法,各自调制成标准液,注入一定量后,按色谱图取标准被测成分的峰面积或峰高为纵坐标,而以标准被测成分的含量为横坐标,制成标准曲线。然后按单体中所规定的方法制备试样液。取试样液按制标准曲线时相同的条件作出色谱图,求出被测成分的峰面积和峰高,在相应组分的标准曲线上查出对应的浓度。
外标法具有简便、快速的优点。外标法不使用校正因子,准确性较高,但色谱操作条件的变化对结果的准备性影响较大。它对进样量的准确性控制要求较高,需操作熟练才能掌握,适用于大批量试样的快速分析
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