一、方法原理：供试品制成0.1mol/L盐酸溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长280nm处检测盐酸土霉素吸收值，计算出其含量。 二、试剂 1. 0.05mol/L草酸铵溶液；2. 二甲基甲酰胺；3. 0.2mol/L磷酸二氢铵溶液（用磷酸调pH值至2.5±0.05）；4. 0.1mol/L盐酸溶液；5. 0.01mol/L盐酸溶液 三、仪器设备 1. 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（pH值适应范围应大于8.0），理论塔板数按土霉素峰计算不低于2500。 1.3 紫外吸收检测器 2. 色谱条件 2.1 流动相：0.05mol/L草酸铵溶液 二甲基甲酰胺 0.2mol/L磷酸二氢铵溶液=75 20 5，用氨试液调节pH值至8.0±0.2。 2.2 检测波长：280nm 2.3 柱温：室温 四、试样制备 1. 称取供试品：精密称取本品25mg，置50mL量瓶中。 2. 对照品溶液的制备：精密称取25mg，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1mL含2.5mg的溶液，摇匀，即得。 3. 供试品溶液的制备：将供试品加0.1mol/L盐酸溶液5mL使溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL，置50mL量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。 五、操作步骤：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长280nm处测定土霉素的吸收值，计算出其含量。

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