培养基中的添加物、PH值、保存的问题

——细胞培养用液：除培养基、血清、谷氨酰胺外，其他几种液体也属必须，不可省略： （1）双抗：200倍，（1ml/支）其终浓度为青霉素100U/ml；链霉素100ug/ml，-24 oC保存。 （2）L-谷氨酰胺：100倍，（1ml/支）， 终浓度2mM，-24 oC保存。 （3）丙酮酸钠：配制浓度50mM，4ml/支，终浓度为1mM/ml， -24 oC保存。 （4）Hepes液：配制浓度1M（5ml/支），一支Hepes加入到200ml 完全培养基中，终浓度为25mM/ml，常温保存。 ——液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。 几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ?C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 度 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。 ——培养用液pH对细胞生长的影响 由于，大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。 但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的PH还会向上浮动0.2左右。 ——液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？ 要冷藏！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的PH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。