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高分子结合物含置测法

喊林溪小少爷-会员头像-www.biaowu.com北纳生物
喊林溪小少爷 2022-09-22 16:13 评论( 0 ) 浏览( 17 )
本法系利用高分子结合物、低分子结合物及游离多糖在 不同乙 醇浓度下,沉 淀 分 离 ,采用紫 外-可 见分光光度法测
定磷含量,计算髙分 子结合物的含量。 试剂 (1) 5 m o l/L 氣 化 钠 溶 液 精 密 称 定 氯 化 钠
2 9 .2 2 g ,加 水 溶解 并稀 释至 1 0 0 m l,室温 保存 。
(2 )1 .5 m o l/L 硫 酸 于 1 体 积 98%的硫 酸 中 加 人 1 1体 积的水,混 匀 。
(3)2. 5%钼 酸 铵 称 取 钼 酸 铵 2. 65g, 加水溶解并稀释 至 100mlo (4)10% 抗 坏 血 酸 称 取 抗 坏 血 酸 10g, 加水溶解并稀 释 至 100ml。 (5 )矿 化 试 剂硫 酸 与 70%高 氯酸等体积混合制得。
( 6 ) 产 色 试 剂 水 、 1 .5 m o l/L 硫酸、2 .5 % 钼 酸 铵 、
10%抗坏血酸,按 2 : 1 : 1 : 1 体积 比混合配制. (7)8(Vg/m l磷 对 照 品 贮 备 液 精 密 称 定 经 100°C干燥的 磷 酸 氢 二 钠 0. 3665g或 磷 酸 二 氢 钾 0 .3 5 0 9 g ,加 水 500ml、
5m ol/L硫 酸 溶 液 10ml溶 解 ,补 加 水 至 1000ml。临 用 时 ,将 贮备液做20倍稀释 ,即 为 磷 对 照 品 工 作 液 。 (8 )1 .0 m o l/L 氢 氧 化 钠 溶 液 称 取 4 g 氢 氧 化 钠 ,加水 溶解并稀释 至100ml。
供 试 品 溶 液 的 制 备 (1) 分 步 沉 淀 原 液 用 生 理 氯 化 钠
溶 液 稀 释 至 多 糖 含 量 20〜 2 8 ^ 7 ^ 1 或 成 品 疫 苗 3ml,加人
3120 血液制品中糖 糖醇测 法 5 m o l/L 氯 化 钠 溶 液 0. 7 5 m l,混匀 后 加人无 水 乙 酵15ml,于
一20X;冰 箱 放 置 72〜96小 时 ,以 每 分 钟 8000 ^ 4X:离 心 90
分 钟 ,吸取上清液为供 试品溶液2 ; 于 沉 淀 中加人 50% 乙醇
溶 液 0 .5 m l,加 玻 璃 珠 ,混 合 后 室 温 放 置 1 小 时 ;再加 人
50%乙 醇 溶 液 1.5m l,混 合 后 室 温 放 置 2 小 时 ,然后以每分 钟 8000转 8°C离 心 1 小 时 ,吸 取 1. 8 m l上清液为供试品溶液
3 ; 沉 淀 再 加 人 l.O m o l/L 氢 氧 化 钠 溶 液 0.5m l, 混合后室温 放 置 1 小 时 ,加 水 1.25m l,作 为 供 试 品溶液 4。
(2)取 多 糖 含 量 20〜28Mg /m l的 原 液 或 成 品 疫 苗 1. Oml
为 供 试 品 1。 (3 )供 试 品 溶 液 的 矿 化 分 别 量 取 1 .0 m l供 试 品 1、
1 .5 m l供 试 品 溶液 2、0 .7 m l供 试 品 溶 液 3、0 .5 m l供试品溶
液 4 各 2 份 ;分 别 加 人矿 化试 剂0. 1 5 m l,置 150°C干 燥 1 小 时 ,然 后升 温 至 180X:干 燥 3 0分 钟 ,再 升 温 至 250°C干 燥 1 小 时 。
测 定 法 量 取 水 1 .9 5 m l,加 矿 化 试 剂 50^1后 加 2.0ml
产 色 试剂 ,混 匀 后 置 37T:水 浴 2 小 时 ,在 波 长 8 2 5 m n 处测
定吸光度,作为空白对照 。
于 矿 化 好 的 供 试 品 溶 液 中 加 水 1.85m l,加产色 试 剂
2.0m l,混 匀 后 置 37TC水 浴 2 小 时 ,在 波 长 825nm处测定吸
光 度 。分 别 量 取 磷 对 照 品 工 作 液 0. 1ml 0. 2ml 0. 4ml
0.8ml 1 .0 m l于 试 管 中 ,每 管 依 次 加 水 1. 85ml 1.75ml
1.55ml 1.15m l、0. 95ml 然 后 每 管 分 别 加 入 矿 化 试 剂
5 0 f i l后 加 2. Oml产 色 试 剂 ,混 匀 后 置 37°C水 浴 2 小 时 ,在
波 长 825nm处测定吸光度。 结 果 计 算 以 磷 对 照 品溶液的 浓 度 对 其 相 应 的吸光度 作 直 线回 归,求得 直线回归方程。将供试品溶液的吸光度代人 直线回归方程,求 出磷含量。
供 试品磷含量(Fg /tn l)分 别 为 : P ^ C A j X S ) / ! . 0
P2 = CA2X 18. 75)/l. 5
P3 = (A3X2. 0)/0. 7
P4 = (A t X 2. 0)/0. 5 - (P s X10)/100
试 验 有 效 性 8 0 % < 朽 / ( 尸2+ 朽 + 尺 )<120%
供试品高分子结合物含量(%) = P 4/ ( 朽 + P 3 + P , ) X 100
供试品游离多糖含量( %) = [1 — / (P2+ P 3+ P 4) ] X 100
式中 f V P2, P3、P4 为 供 试 品 1,供 试 品 溶 液 2,
供 试 品溶液 3 , 供 试 品 溶 液 4 的 磷 含 量 ;A 、A 2、A 3、A, 为 供 试 品 1 , 供 试 品 2 , 供 试 品 3 , 供 试 品 4 中取样矿化后的 磷 含 量 。
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