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紫外可见分光光度法测定维生素B12含量

发布时间:2023-05-04 15:28 作者:北纳生物编辑-陈丹

维生素[U1] B12是含钴的有机药物,为深红色结晶,又称为红色维生素B12或氰钴胺,是唯一含有主要矿物质的维生素。测定维生素B12片剂含量的传统方法是运用紫外可见分光光度计,以吸光系数法为测定含量依据,但是该方法对仪器精密度要求较高。标准曲线法是紫外可见分光光度法中最经典的方法,若认定一台仪器,固定[U2] 其工作状态和测定条件,则该方法可消除因仪器而产生的一些误差,且操作简便易行。本文利用紫外可见分光光度计,建立了维生素B12片剂含量测定的标准曲线法,并利用该方法对山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素B12片剂的5个不同批号进行了V-B12的含量测定,方法准确、简便、重复性好。

1  仪器与试药

 

1.1  仪器

754型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)。

 

1.2  试药

维生素B12对照品(中国药品生物制品检定所);维生素B12片剂(山西亨瑞达制药有限公司,批号060801,060701,061002,060902,070303)。0.8滤膜[AUTOMATIC SCIENCE(TIANJIN) INSTRUMENT CO;LTD]。

2  方法与结果

 

2.1  测定波长的选择

维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰:278 nm、361 nm、550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少,吸收又最强,中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数E1%1 cm值(207)为计算含量依据。本实验选择361 nm为测定波长,以标准曲线法为计算含量依据。

 

2.2  溶液的制备

 

2.2.1  对照品溶液的制备

精密称定对照品维生素B12 0.0025 g,置于25 mL容量瓶中,加水至刻度,摇匀。将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。

 

2.2.2  供试品溶液的制备

维生素B12片剂为糖衣片,取本品50片,除去糖衣,使其呈现粉红色,研细,精密称定研磨样品,约相当于维生素B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 μg),置50 mL容量瓶中,加水35 mL,充分振摇30 min使其溶解,加水稀释至刻度,密塞,再用力振摇10 min,静置,取上清液,用0.8 μm的微孔滤膜滤过,滤液放置冰箱中冷藏备用。

 

2.3  线性关系

标准曲线的绘制:精取2.2.1项下的储备液,用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀释,摇匀。在361 nm波长处测定吸光度。

以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线,得回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。结果表明维生素B12对照品溶液在5.00 μg/mL~100.00 μg/mL范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。

 

2.4  精密度试验

精取浓度为100 μg/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次,测得维生素B12的平均吸光度为2.087,RSD为0.7%(n=5)。RSD数值较小,说明该方法精密度好。

 

2.5  稳定性试验

取同一供试品溶液,在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后,按2.7项下含量测定法测定,计算得平均吸光度为0.468,RSD为0.99%(n=5)。结果表明供试品溶液在冷藏温度下24 h内基本稳定。

 

2.6  重复性试验

精取同一批号样品,分别按2.2.2项的方法制备一式5份的供试品溶液,按2.7项下含量测定法测定,计算得维生素B12的平均含量为22.6 μg/mL(批号为070303),RSD为 1.08%(n=5),说明该方法有较好的重复性。

 

2.7  含量测定

以水为空白,取2.2.2项下的滤液,摇匀,设定吸收波长为361 nm测定吸光度,按标准曲线法为计算含量依据。

维生素B12片剂的标示量为25.0 μg,由以上测定结果可知,山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素B12片剂含量均在标示范围90.0%~110.0%之内。RSD较小,说明该厂生产的药品含量稳定。

3  讨论

3.1.  维生素B12主要来源是动物性食物,存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中。在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动。维生素B12能促进红血球的形成和再生,防止贫血;促进儿童发育,增进食欲;增强体力;维持神经系统的正常功能;促使注意力集中,增强记忆力与平衡感。能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。维生素B12为细胞分裂和维持神经组织髓鞘完整所必须。主要用于治疗恶性贫血,与叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗,目前疗效有争议。口服维生素B12仅用于已证实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏。

3.2  本实验采取紫外可见分光光度法考察了片剂维生素B12的含量,将对照品按不同比例用水稀释,在361 nm波长处进行紫外可见吸收测定,得到标准曲线。将维生素B12片剂研磨,精密称定并加水溶解,利用微孔滤膜过滤得到滤液,作为供试品溶液。利用该方法得到的样品溶液,按中国药典规定波长361 nm测定吸光度,以标准曲线法为测定含量依据,结果表明,经紫外可见吸收测定,所测片剂含量均在标示范围之内。

3.3  本实验需避光操作。维生素B12片剂为糖衣片,呈水溶性,除去糖衣时要刮净,研细,减小干扰,使溶解度增高。

3.4  因紫外可见分光光度法所需样品量少,本实验采用注射器过滤器进行过滤,得到供试品溶液。

3.5  本方法简便、准确、灵敏度高,可作为测定维生素B12片剂含量的方法。

相关链接:维生素B12氰钴胺叶酸,白细胞,血红蛋白维生素北纳生物

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