培养皿上的细菌，如何PCR及测序

1503****9035 2021-11-24 19:10 评论( 2 ) 浏览( 1839 )

培养皿上的细菌如何做成菌液进行PCR以及测序？有没有详细的步骤或流程。？小白一枚😂😂😂

自由飞翔

按照一般的步骤，可以把每个菌落挑出来进行培养提取质粒，然后质粒进行测序或者酶切验证目的片段。但是从培养细菌到最后送测序，花费太多时间。如果说只有一个菌落去验证，那工作量倒不是很大；万一有100个菌落，怎么办呢？那么，我们就可以进行菌落PCR筛选。基本步骤 1. 单菌落挑取把LB培养基倒入排枪槽中，然后用排枪加400μL LB培养基到48孔深孔板，用镊子拿已灭菌的小白枪头挑取平板上的单菌落并放到48孔深孔板中，同时在48孔深孔板和相应的表单上做好记录，注意对于蓝白斑筛选的板子要挑的是白斑。挑好的48孔深孔板用封口膜盖好并做好相应标记（日期、板号等），用针头在封口膜打孔，把它放在37℃摇床上摇一个小时。 2. 菌落PCR反应
2022-12-14 09:27:52

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天边

在100微的小ep管里加入9微的无菌水，然后用小枪头在菌落上轻轻沾一下后，放入无菌水中来回混合。混合液就可以当模板做菌落PCR了。
2021-12-09 17:13:23

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培养皿上的细菌，如何PCR及测序

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