咖啡因，化学式为C₈H₁₀N₄O₂，是一种黄嘌呤生物碱化合物，是一种中枢神经兴奋剂，能够暂时的驱走睡意并恢复精力，临床上用于昏迷复苏。有咖啡因成分的咖啡、茶、软饮料及能量饮料十分畅销，因此，咖啡因也是世界上最普遍被使用的精神药品。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，咖啡因属于3类致癌物，即“尚不能分类”的致癌物。因此检测茶饮料中咖啡因含量是否超标是至关重要的，今天小编给大家整理了一种检测方法，本实验采用液相色谱法检测茶多酚中的咖啡因含量。

一、仪器与试剂

1.1 仪器

高效液相色谱仪，配紫外检测器。

1.2 色谱条件

柱：c18，5 um，150 mmX4.6mm

流动相: 甲醇：0.067mol/L乙酸溶液40:60

流速：1.0ml／min

柱温：35℃

检测波长=286 nm

进样量：10出ul

1.3 试剂

甲醇（HPLC），

三氯甲烷（A11）。

0.067mol/L醋酸溶液：4.0g醋酸，用蒸馏水固定体积为1000 ml。

咖啡因标准品：准确称取0.10009咖啡因（纯度>99.8%），用重蒸水定容1000毫升。溶液为1.0 mg/ml。

二、实验方法

2.1 样品处理

以0.25≤1.0g样品加入2~3ml蒸馏水，加入10.0ml比色管，与10.0ml三氯甲烷准确混合，隔夜超声提取30 min(或离心15 min)，经0.45μm滤膜进行液相色谱分析。

2.2 标准曲线、相关系数及检出限

咖啡因标准浓度系列分别为0.00、10.00、25.00、50.000、100.00、200.00和400.00ug/ml。在286nm处测定10ul的峰面积，绘制峰面积咖啡因浓度标准曲线，r=09998。检测限为2.0ug/ml（按仪器噪声响应值的3倍计算）。

三、结果和讨论

3.1 流动相的选择

当GB/T5009.139.2003给出的移动相位用于确定时，出现标准峰的头分叉，这影响了确定结果。该方法给出的移动相峰值时间快，标准峰类型好。

3.2 咖啡因的提取

在46毫升水中、75毫升乙醇、6毫升三氯甲烷和600毫升乙醚中的溶解度为1克,茶多酚的溶解度可溶于乙醇和乙酸乙酯中，不溶于三氯甲烷。根据不同的溶解度，茶多酚中的咖啡因可以得到很好的提取。

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