1、原理：

维生素C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢型两种。还原型抗坏血酸还原染料2，6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含抗坏血酸的量成正比。

2、试剂

⑴1%草酸溶液：

⑵2%草酸溶液：

⑶抗坏血酸标准液：准确称20mg抗坏血酸溶于1%草酸中，并稀释至100ml，吸5ml于50ml容量瓶中，加入1%草酸至刻度，此溶液每毫升含有0.02mg抗坏血酸；

⑷0.02% 2，6-二氯靛酚溶液：称取2，6-二氯靛酚50mg，溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至250ml，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每星期标定一次。

⑸0.001 mol/LKIO3标液：吸0.1 mol/LKIO3溶液5ml→于500ml容量瓶内→加水至刻度，每毫升相当于抗坏血酸0.008mg；

⑹0.5%淀粉溶液；

⑺6%KI溶液；

3、溶液的标定

(1)抗坏血酸溶液的标定

吸取抗坏血酸标准溶液5ml于三角瓶→加6%KI溶液0.5ml→加1%淀粉3滴→用0.001mol/LKIO3标液滴定到淡蓝色。

计算：抗坏血酸浓度c(mg/ml)=(V1×0.088)/ V2

V1——滴定时消耗0.001mol/LKIO3标准溶液的体积(ml)

V2——滴定是时所取抗坏血酸的体积(ml)

0.088——1ml0.001 mol/L KIO3标液相当于抗坏血酸的量(mg/ml)

(2)2，6-二氯靛酚溶液标定：吸5ml已知浓度抗坏血酸溶液标准溶液→加5ml1%草酸→用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点。

4、操作方法

⑴提取：称样50g→加2%草酸100ml→到入捣碎机中→处理→过滤→颜色若深可加白陶土

⑵滴定：吸5ml样液→于三角瓶→用染料滴定至粉红色→15秒内不褪色。

计算：

抗坏血酸(mg/100g)=(V×T)/ W ×100

V——消耗染料体积(ml)

T——1ml染料所能氧化抗坏血酸的毫克数

W——滴定时所有滤液中含有样品的克数

5、注意事项

⑴靛酚法测定的是还原型抗坏血酸，方法简便，较灵敏，但特异性差，样品中的其他还原性物质(如Fe2+、Sn2+、Cu2+等)会干扰测定，使测定结果偏高。

⑵所有试剂的配制最好都用重蒸馏水；

⑶样品进入实验室后，应浸泡在已知量的2%草酸液中，以防氧化，损失维生素C；贮存过久的罐头食品，可能含有大量的低铁离子(Fe2+)，要用8%的醋酸代替2%草酸。这时如用草酸，低铁离子可以还原2，6-二氯靛酚，使测定数字增高，使用醋酸可以避免这种情况的发生；

⑷整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化；

⑸在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇消除；

⑹测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体积。

相关链接：维生素C，2，6-二氯靛酚，抗坏血酸，草酸，碳酸氢钠，辛醇，醋酸，北纳生物

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