D-柠檬烯（D-limonene）是单环单萜，安全无毒性。本实验通过D-柠檬烯对酒精性肝损伤大鼠的干预，探究其对大鼠酒精性肝损伤脂质代谢的保护，同时为D-柠檬烯在酒精性肝损伤保护作用研究中提供实验支持、理论和实践依据。

1　材料与方法

1.1　材料与试剂

D-柠檬烯（D-limonene）：纯度97%德国Sigma公司。

谷丙转氨酶（alanine transaminase，ALT）、谷草转氨酶（aspartate transaminase，AST）、碱性磷酸酶（phosoporic acid，ALP）、胆碱酯酶（cholinesterase，CHE）、甘油三酯（triglyceride，TG）、胆固醇（cholesterol，CHO）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）南京建成生物工程研究所；甘利欣（甘草酸二铵胶囊）江苏正大天晴药业股份有限公司。

1.2　仪器与设备

7600型全自动生化分析仪日本日立公司；3K30型低温离心机德国Sigma公司；JEM-1200EX型电子显微镜日本JEOL公司。

1.3　方法

1.3.1　动物分组与实验

Wistar品系雄性大鼠，SPF级，70只，体质量180～200g，动物合格证号：SCXK（鲁）20130001，实验动物由青岛派特福德白鼠养殖专业合作社提供。饲喂普通饲料，自由饮水进食。7d适应性喂养后，采用随机数字表法按体质量将70只大鼠随机分为7组，每组10只。A组为空白对照组，每日给予蒸馏水灌胃，前2周8mL/（kg·d），后4周12mL/（kg·d）。B组为酒精模型组，每日灌胃体积分数为50%的乙醇，前2周8mL/（kg·d），后4周12mL/（kg·d）。

3个不同剂量D-柠檬烯低、中、高剂量处理组每日分别灌胃D-柠檬烯100、200、400mL/（kg·d），其中D-柠檬烯与A、B组等量的50%的乙醇混合后灌胃。F组为水和D-柠檬烯空白高剂量组，每日给予D-柠檬烯400mL/（kg·d），D-柠檬烯与A、B组等量的蒸馏水混匀后灌胃。G组为甘利欣药物对照组，灌胃量200mL/（kg·d），甘利欣与A、B组等量50%乙醇混合后灌胃。实验周期为6周。末次灌胃后禁食不禁水12h后，水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，分离血清，留取肝组织，-20℃保存备用。

1.3.2　检测指标与方法

HE染色法（×400）观察肝组织形态结构：肝组织经固定、包埋、切片后染色观察。

透射电镜（×5000）观察超微结构：肝组织4%戊二醛灌流固定，包埋，制作切片，电镜下观察肝细胞超微结构变化。

转氨酶等酶类及血脂水平测定：具体操作方法按试剂盒说明书进行生化检测。

1.4　统计学处理

采用SPSS16.0软件方差分析对数据进行结果统计分析，以P＜0.05表示结果有统计学意义，并用  表示数据统计结果。

相关链接：D-柠檬烯，谷丙转氨酶，胆固醇，甘油三酯，甘利欣，胆碱酯酶，乙醇，戊二醛，北纳生物

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