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革兰氏染色是鉴别细菌种类的重要特性之一,这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同,可将细菌分成两类,即革兰氏阳性与革兰氏阴性。那么革兰氏染色具体实验过程是怎样的呢?
下面我们以BNCC132503蜡样芽孢杆菌为例,为大家演示革兰氏染色过程!
一、涂片:
取洁净载玻片,滴加一小滴生理盐水,用一次性接种环挑取待检菌培养物少许,研入生理盐水中,与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的菌膜。
二、干燥:
涂片自然干燥,也可在远离火焰上方的热空气中烘干,切勿靠近火焰。
三、固定:
将涂片涂有菌膜的一面向上,迅速在火焰上来回通过3次,玻片反面触及皮肤、热而不烫为宜。
四、初染:
1.滴加草酸铵结晶紫染液于菌膜表面,使染液覆盖菌膜,染色1分钟;
2.拿住玻片使之成45°角,用蒸馏水把多余的染料冲洗掉,用吸水纸吸去多余的水,等待干燥。
五、媒染:
1.滴加革兰氏碘液覆盖菌膜,维持1分钟;
2.用蒸馏水缓慢冲洗涂片上的染色液,等待干燥。
六、脱色:
滴加脱色酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,15-30s后进行水洗,用吸水纸在载玻片边缘吸干积水,等待干燥。
七、复染:
滴加沙黄复染液于菌膜表面,染色1分钟,蒸馏水冲洗,用吸水纸在载玻片边缘吸干积水,等待干燥
八、镜检:
滴加香柏油用显微镜进行观察,蜡状芽孢杆菌在显微镜下形态为杆状,菌体被染成蓝色,因此该菌为革兰氏阳性菌。
如何使用显微镜?请关注我们下期视频《显微镜的使用方法》
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