众所周知，利用生物体的RNAi现象发展出来的RNAi技术是目前最“喜闻乐见”的基因沉默 技术。 在科研中制备siRNA的方法主要有化学合成法和转录法。其中，转录法，通俗点说就是“借 腹生子”。就是通过DNA载体，利用细胞内源的RNA聚合酶皿(RNA Po皿)，如U6、H1等 的启动子驱动转录表达shRNA，转录产生的发夹状shRNA可以被细胞内源的Dicer蛋白识别 并加工成siRNA，然后与Ago蛋白结合发挥作用。将这些shRNA的表达框用质粒或者腺病毒 等包装一下转入宿主体内，就可以实现在动物整体或特定组织中沉默靶基因。 虽然这项技术可以实现在动物整体或特定组织中沉默靶基因，但是不可避免的是在这个过程 中siRNA会“乱来”，比如，偶尔会饥不择食，慌不择路地与非特异的RNA序列结合，把人 家该正常表达的“无辜”基因沉默掉，这就是所谓的脱靶作用(off-target)。 作为siRNA的前身shRNA也会瞎捣弄，就是对细胞内源miRNA的竞争抑制。由于shRNA的 加工需要细胞内的Dicer、Exportin-5、Ago等蛋白质因子协助，而这些万人迷般的蛋白质因 子也是细胞内源miRNA加工成熟所必须的。由于miRNA是细胞功能的重要调控分子，过表 达的shRNA与内源miRNA竞争相同的加工机器，必然对内源miRNA的表达和功能造成抑制 作用。shRNA瞎捣弄的后果可以很严重，比如在小鼠肝脏中长期高表达shRNA会造成严重 的肝脏损伤并引发肝癌导致动物死亡。 因此，设计一种低毒副作用的RNAi载体进行高效沉默靶基因很重要。