琼脂糖凝胶电泳实验技巧

第一步：胶液的制备 称取0.4g琼脂糖，置于200ml锥形瓶中，加入50ml 0.5xTBE稀释缓冲液，放入微波炉里加热，直到琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8%琼脂糖凝胶液。总液体量不宜超过锥瓶的50%容量。否则会溢出来的。还要擦洗微波炉。加热过程中要不时摇动， 使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。 第二步：胶板的制备 倒胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀。东一块西一块的。果冻做出来就不好看啦。速度也不可太快，否则容易出现气泡。待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶。 第三步：加样 注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。 第四步：电泳 加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在60-80V，电流在40mA以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm时，停止电泳。 第五步：染色 未加EB的胶板在电泳完毕后移入0.5Rg/ml的EB溶液中，室温下染色20-25分钟。 第六步：观察和拍照 在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。DNA存在处显示 出肉眼可辨的桔红色荧光条带。紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损伤眼睛。