DNA纯化是分子生物学研究中经常需要用到的一种方法。一般来说，做DNA纯化有3个目 的：1.获得高纯度的DNA； 2,浓缩DNA； 3,用DNA做测序。 DNA纯化实验基本上可以分为PCR清洁试剂盒纯化法和DNA凝胶回收纯化法两大类。PCR 清洁试剂盒纯化法又称为硅胶膜吸附法。因为它的原理是:硅胶膜可在高盐条件下结合DNA, 又可在低盐条件下与DNA分离。而DNA溶液中的其他渣渣包括引物、单核苷酸、酶、矿物 油、盐离子等，因为没有DNA的这种神特性，所以会被分离开来。 如果你的PCR产物得到的是单一条带，完全可以直接纯化。那么问题来了。如果发现有杂带？怎么办？有哪些办法可以提取得更干净？ 那么就诞生了我们的第二种方法：DNA凝胶回收纯化法。这种方法简单粗暴有效率，也能纯化得比较彻底。现在已经慢慢地取代了第一种方法，成为了DNA纯化的主流方法。 扩增时岀现非特异性条带，那么在胶回收时切胶很重要，切胶时尽量选择目的基因条带，可以将目的基因所在的胶的边缘弃去一些，尽量不要切上含有非特异性带的胶。切胶之后就是回收了。这里就要讲到毛博的独门protocol 市售的试剂盒常常有小片断回收效率很低的问题。其实完全没有必要买试剂盒。回收可以用酚氯仿。PCR产物经过酶切、回收等步骤后，损失太大。我的做法是：简化步骤、减少核酸在处理过程中的损失，让较多量的PCR产物和质粒片断进入酶连反应一一以量取胜。 大致的做法是：制作100RL PCR产物；酒精沉淀回收PCR产物；PCR产物及载体酶切；跑回收胶；将回收胶上的PCR产物和载体片断切下，回收到一个试管中；冰冻、碎胶，酚、氯仿抽提，酒精沉淀；加入8微升水、1微升连接酶和1微升连接buffer，4度过夜；转化涂板。